柱式質(zhì)粒DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結(jié)合DNA，zui后洗去雜質(zhì)，快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從1-5 mL過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)20 ug的高純度質(zhì)粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。
1. 快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。
2. 不需要預(yù)平衡離心吸附柱。
3. 洗柱液即開即用，不需要額外加乙醇。
4. 純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。
5. 產(chǎn)量高，每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 ug/mL。
6. 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
7. 價(jià)格低，比多數(shù)國內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
規(guī)格及成分 成 份 50次大紙盒包裝 100次大紙盒包裝
溶液A（CAT#:6020） 13 mL 26 mL
溶液B（CAT#:60205B） 13 mL 26 mL
溶液C（CAT#:60205C） 18 mL 36 mL
RNase A溶液,10mg/mL
（CAT#:3160） 0.15 mL 0.3 mL
通用洗柱液（CAT#:60408） 50 mL 100 mL
DNA洗脫液2.0
（CAT#:111205） 10 mL 10 mL
離心吸附柱（CAT#:90303） 50只 100只
離心吸附柱套管（CAT#:90511） 50只 100只
使用手冊(cè) 1份 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，RNase A需要-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 無
使用方法 1. 先將全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，搖勻后再取用，未用完的溶液A在4℃保存。
2. 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)12-16小時(shí)（搖床轉(zhuǎn)速200-300）。注意：建議使用LB培養(yǎng)基，營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會(huì)使菌體濃度過高，超過純化系統(tǒng)處理能力而降低DNA質(zhì)量。另外，延長培養(yǎng)時(shí)間有利于提高質(zhì)粒DNA濃度，但是菌液培養(yǎng)過長時(shí)間會(huì)因細(xì)胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒DNA濃度降低。
3. 用1.5 mL離心管收集1-4 mL過夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫12,000 rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。
4. 加入250 uL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸（此步在冰上操作效果更佳）。注意：細(xì)胞未充分懸浮會(huì)影響后續(xù)操作，可以使用漩渦振蕩器幫助混勻或使用Tip吸頭吹打沉淀至*混勻。
5. 加入250 uL溶液B（如果溶液B有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復(fù)顛倒混勻4-6次，看到溶液變粘即可，然后冰上放置不超過4-5分鐘。注意：此步處理不能超過5分鐘，否則DNA的堿損傷比較嚴(yán)重。同時(shí)千萬不要?jiǎng)×艺袷?，否則基因組DNA斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒DNA。溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(huì)進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。
6. 加入350 uL冰上預(yù)冷的溶液C，反復(fù)顛倒混勻4-6次，可見白色沉淀物產(chǎn)生，然后冰上放置至少5分鐘。
7. zui高轉(zhuǎn)速（12,000 rpm以上）4℃離心5分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大，有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象，取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。如果此步的離心在室溫進(jìn)行，更容易出現(xiàn)沉淀物漂浮的現(xiàn)象。
8. 靜置2分鐘以讓質(zhì)粒DNA與吸附柱充分結(jié)合，此步十分重要。
9. 室溫12,000 rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。
10. 加入500 uL的通用洗柱液，室溫12,000 rpm離心1分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
11. 重復(fù)上步1次。
12. 室溫12,000 rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用（如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中）。
13. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5 mL塑料離心管（自備）中，加入30-100 uL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用于洗脫，但產(chǎn)量稍微有所降低。
14. 室溫12,000 rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒DNA。
15. 由于天澤基因的吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng)，如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質(zhì)粒DNA（相當(dāng)于*次洗脫的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。
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